3端是C端还是N端 怎么区分蛋白的C端和N端

2025-01-0502:39:50销售经验1

在重组蛋白的研发与生产过程中,经常将目的蛋白的N端或C端与各种特定蛋白、多肽或寡肽标签进行融合表达。这样的操作不仅能保留天然蛋白的大部分结构,还能增强其溶解性、防止降解、促进以及便于纯化。接下来,我们将详细介绍生物研发生产过程中常见的融合蛋白标签。

一、纯化标签

His标签

His标签是目前最流行的融合标签蛋白。由六个组氨酸残基组成,可插入在目的蛋白的C端或N端。它的分子量小,一般不影响目标蛋白的功能,并且可以在非离子型表面活性剂存在或变性的条件下进行纯化。该标签与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),对重组蛋白进行分离纯化。

GST标签

GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签本身是一个在解毒过程中起重要作用的转移酶。因其天然大小适中且具有高度可溶性,常被用于增加外源蛋白的溶解性。GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化。

MBP标签

MBP(麦芽糖结合蛋白)标签的大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。它可以增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真白。融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。

二、其他常用融合标签

FLAG标签

FLAG标签是一个由8个氨基酸(DYKDDDDK)组成的融合多肽。作为融合表达标签,它通常不会与目的蛋白相互作用且不影响其功能。融合FLAG的目的蛋白可以直接通过FLAG进行亲和层析,此方法纯化效率高且能保持融合蛋白的活性。

Avi Tag

AviTag标签是一个15个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点。该标签可被生物素连接酶生物素化,便于通过低亲和性的单体抗生物素蛋白或其衍生物进行纯化。

SUMO标签

SUMO(小分子泛素样修饰蛋白)标签不仅可以提高融合蛋白的表达量,还具有抗蛋白酶水解及促进靶蛋白正确折叠、提高重组蛋白可溶性等功能。

Halo Tag和SNAP Tag

这两个标签均可在原核和真核系统中表达,并可与特定的配体有效地共价结合,用于活细胞内、溶液中或固态相(如SDS-PAGE凝胶)等环境下的蛋白质检测与纯化。

三、报告标签

报告标签如c-Myc标签和HA标签,常用于Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中,可检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。

四、荧光标签蛋白

荧光标签蛋白如eGFP/eCFP/eYFP等,具有不同的激发波长和发射波长。这些荧光标签的融合表达目的蛋白后具有多种优点,如不用破碎细胞和加任何底物就能在活细胞中发出荧光,实时显示目的基因的表达情况等。

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