一、服务检测信息概述
检测方法与技术
采用SYBR Green染料法进行检测。
分析手段
实施相对定量分析。
二、主要实验材料详细介绍
主要仪器设备
实验所需的高精度仪器列表。
关键试剂介绍
详细列出主要试剂及其用途。
三、实验操作流程详解
总RNA抽提步骤
步骤一：样品前处理
取约100mg样本至冷冻研钵中，加入液氮研磨至粉末状。移至含有1mL RNAiso Plus的1.5mL离心管中，充分振荡混合后室温静置约5分钟。
步骤二：相分离操作
加入0.2mL氯仿至每1mL RNAiso Plus中，再次振荡混合15秒后，室温静置约3分钟。随后，在4℃下，以12000rpm的速度离心15分钟。
步骤三：沉淀处理
将水相转移至新的1.5mL离心管中，加入0.5mL异丙醇至每1mL RNAiso Plus中，混合均匀后室温静置10分钟。再次以4℃、12000rpm的速度离心10分钟。
步骤四：洗涤操作
弃去上清液，加入1mL 75%的乙醇，混合均匀后以4℃、7500rpm的速度离心5分钟。
步骤五：RNA溶解及浓度纯度测定
弃去上清液，让RNA沉淀自然空气干燥约5分钟（注意不要完全干燥）。随后，使用适量的DEPC处理水溶解RNA沉淀。使用分光光度计测定RNA的浓度和纯度并记录数据。
反转录反应流程
按照特定的组分配制RT反应液，并按照既定程序进行反转录操作。具体为：37℃下进行15分钟，然后85℃下进行5秒。完成后将产物存放在-20℃的环境中。
定量PCR检测步骤
将Mix在4℃下融化并混合均匀后进行离心。按照指定配方配制反应液，将反应管短暂离心以确保所有反应液在反应孔底部。采用三步法程序进行PCR反应。
四、相对定量△△Ct分析原理及方法详述
荧光信号理论方程解释
详细解释了荧光信号理论方程，包括Rn、RB、RS、X0和E等变量的含义及它们之间的关系。阐明了总信号、本底信号和分子数量之间的关系。
公式推导及意义
详细推导了相关公式，解释了当循环次数达到Ct值时，PCR效率E为100%的情况下，如何通过公式计算起始模板数量X0。
内参基因均一化处理及样本差异校正
介绍了内参基因均一化处理的方法，用于校正各样品在核酸数量上的差异，并详细解释了校正值的意义及计算方法。
处理样品与对照样品的比较分析
介绍了如何比较不同样品间某个基因的表达量差异，并计算相对值及倍数变化。
五、实验结果汇报与数据呈现
原始数据保存在“原始数据”文件夹中，而引物信息、上机排版及检测结果详细信息则见提供的Excel表格“检测结果”。对实验结果进行了简洁的总结和呈现。
六、项目内容概览与检测重点说明