实验中回收率计算公式 HPLC回收率计算

2025-01-3111:51:39创业资讯0

经由液体培养与启动子交换技术,成功上調了枯草芽孢杆菌THY-7的Pg3基因,这一实践不仅验证了芽孢杆菌脂肽的最高产量,更创下了每升9.74克的惊人纪录。另一研究则专注于优化生长条件与代谢工程,显著提高了LL3解淀粉芽孢杆菌中抗真菌脂肽iturin A的产量。通过响应面方法的发酵条件优化,iturin A的产量提升至每升99.73毫克的显著水平。

运用高效液相色谱(HPLC,Agilent1100型)分析,这些芽孢杆菌菌株培养液的次生代谢产物时,采用了C18柱进行分离。在28摄氏度的恒温下,细菌细胞经过五日的生长周期后,以13000rpm的转速离心十分钟,以便提取脂肽。所得上清液经浓HCl酸化后,再以甲醇萃取酸性沉淀(如图1所示)。

关于脂肽物质的纯化步骤如下所述:

1. 培养细菌:在精心配制的培养基中让细菌进行发酵。

2. 粗提处理:通过离心将发酵液中的菌体分离出去。

3. 部分纯化:向上清液中加入2.0N的盐酸,利用甲醇或丁醇进行沉淀萃取。

4. 纯化进程:采用真空蒸发仪对提取物进行浓缩,继续用甲醇或丁醇进行二次萃取。

5. 超纯处理:通过色谱柱进一步纯化,随后使用高效液相色谱进行精细纯化。

针对环脂肽的特殊分离方法中,于无菌纸盘上培育了含有200毫升麦球孢菌孢子与细菌培养物EB14的混合物,并在室温下进行孵育。经过72小时的孵育期后,从生长抑制区提取了重量为300毫克的琼脂。处理这些琼脂时,采用了乙腈/水混合法。之后,运用傅里叶变换离子回旋共振质谱仪对从琼脂塞样品中提取出的化合物进行分析。

另一研究中,成功从解淀粉芽孢杆菌中分离并提取出C16丰原素A。利用fmb60发酵肉汤培养基,并通过加入6M的HCl将其酸化至pH 2.0。后续步骤包括过夜沉淀及离心分离酸性沉淀物,再将其在甲醇中复溶。C16丰原素A的分离则是在高效液相色谱(HPLC)系统检测后完成的。

总体而言,脂肽的大规模生产需结合微生物学、发酵技术、化学、工程和质量保证等多学科方法。虽然芽孢杆菌脂肽在工业应用中的生物合成效率仍有待进一步研究提升,但这些进展为制定大规模生产这些脂肽的策略提供了重要的参考与见解。

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