定量分析具体方法_常用的定量方法有哪些

2025-02-0302:42:25营销方案0

内标法

定义:在分析样品中加入一定重量的纯物质作为内标物(详见内标物相关说明),随后进行色谱分析。通过测定内标物和待测组分的峰面积(或峰高)及相对校正因子,再结合公式计算,即可得出被测组分在样品中的百分含量。

色谱内标物要求:

(1) 内标物应为样品中不存在的纯净物质。

(2) 内标物的性质应与待测组分相近,以便其色谱峰与待测组分峰靠近并完全分离。

(3) 内标物与样品应完全互溶,且不应发生化学反应。

(4) 内标物的加入量应接近待测组分的含量,以确保分析的准确性。

定量核磁内标选择原则

通常选择的内标物需具备合适的参考特征峰,并与待测组分有较好的分离度。内标物应能完全溶解在所选的氘代试剂中,不与待测组分反应且性质稳定。内标物的分子量与特征峰质子数之比需合理,同时所选的氢应与待测样品的氢适宜匹配。

实例:A项目内标法核磁共振定量分析

选择合适的氘代试剂,实验表明样品在氘代二甲基亚砜中能完全溶解。通过氢谱确定样品的氢化学位移,主要在8.1、8.7、9.4附近。

接着,筛选合适的内标物。从现有内标物中筛选出能溶于DMSO的,如苯甲酸苄酯、1.3.5三甲氧基苯、2.3.5三氯吡啶、碳酸乙烯酯等。

最终,选择与目标分子式中苯基氢匹配的氢,即1.3.5-三甲氧基苯作为内标物。其特征氢化学位移值为6.1,而溶剂峰位置在3.3和2.5。选择8.1附近的峰作为特征峰,并根据分子量和氢的个数计算称样量。通过公式计算得出目标物的含量结果。

外标法

定义:此方法使用待测组分的纯品作为对照物质,通过比较对照物质和样品中待测组分的响应信号来进行定量分析,主要用于已知杂质的控制。

标准品的选择一般要求主成分含量在95%以上。

外标法的优点在于方法简单,不需要校正因子,样品中的其他峰不影响待测组分的含量测定。它需要标准品STD,且在不同的仪器上测试时,结果可能存在误差。

实例:B项目外标法测定主成分含量

制备一个主成分含量为98.9%的成品,以0.4mg/ml的浓度(峰高约800)配置成标准品溶液。同样浓度的样品也进行配置,得到图谱后,比较待测物峰面积与标准品的峰面积,从而计算得出含量。

面积归一法

定义:此方法将所有出峰的组分含量之和视为100%,并计算各峰面积占总峰面积的百分比。常用于考察供试品的纯度。

该方法的前提是各有机杂质均出峰、在测定波长下的吸收系数一致(适用于UV检测器),且各组分的吸收均在线性范围内。虽然是一种较为粗略的方法,但在没有对照品的情况下,可通过峰面积归一化法标定样品含量。

优点:该方法重复性好,简便准确,进样浓度和进样量的变化影响较小。

缺点:用于杂质检查时,因杂质响应因子不同可能产生较大误差,主要用于粗略考察杂质含量。

自身对照法

该方法一般分为加校正因子和不加校正因子两种方法。

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