在 qPCR 实验过程中，实验者常常会遇到扩增曲线和熔解曲线异常的问题，如断裂的扩增曲线、复孔间重复性不佳、熔解曲线杂峰等各类情况，这些问题可能会让实验者感到困惑。
为了帮助解决这些问题，今天我们将为大家详细整理扩增曲线和熔解曲线的常见问题，并分析解答。我们还在文末准备了两个小惊喜，希望能够为大家带来帮助和乐趣。
01 扩增曲线与熔解曲线的概述
荧光定量PCR的结果判断，最直观的就是看扩增曲线是否符合正常标准。对于染料法qPCR，还需要检查熔解曲线是否标准。
扩增曲线是随着PCR反应的进行，扩增产物不断积累，荧光信号强度不断增加，仪器每经过一次循环，收集一次荧光信号，从而得到扩增曲线图。而熔解曲线则是指反应随温度升高，双链扩增产物逐渐解链，荧光信号逐渐减小的曲线。
良好的扩增曲线和熔解曲线的标准包括：扩增曲线有明显的四个时期，基线期平滑无上扬，拐点清楚，指数期明显，曲线整体平滑；熔解曲线单峰，无杂峰。
02 扩增曲线问题及解决方案
（1）无扩增曲线：可能原因是未打开荧光信号采集，需检查程序设置。也可能是引物降解，可通过PAGE电泳检验引物的完整性。模板浓度低也是一个可能的原因。
（2）扩增曲线不光滑：可能是仪器长时间未校准，建议定期校准仪器。也可能是RNA模板不纯，建议增大模板稀释倍数或重新制备较高纯度的RNA模板。
（3）其他问题及解决方案因篇幅原因未尽详述，但都会在后续内容中一一解答。
03 熔解曲线问题及解决方案
熔解曲线的问题及解决方案与扩增曲线类似，也会详细介绍杂峰、无熔解曲线等问题及其对应的解决方法。
通过了解和掌握这些常见问题的原因和解决方法，实验者可以更好地进行qPCR实验，获得更准确的实验结果。
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希望通过这些整理和分享，能够帮助大家更好地进行qPCR实验，获得满意的结果。如有任何疑问或需要进一步帮助，请随时联系我们。