是否曾经有过因混淆PCR、RT-PCR、qPCR、Real-time PCR、real-time RT-PCR等众多缩写而感到困惑的经历?初次接触这些PCR缩写时,确实容易让人感到迷茫。
RT-PCR,即反转录PCR,是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的形式。在RT-PCR过程中,RNA链被逆转录成互补的DNA链,随后以此为模板进行DNA扩增。
事实上,Real-time PCR与qPCR是同一概念,均为实时定量PCR。这意味着在PCR过程的每个循环中都会实时记录数据,从而能够精确分析起始模板的数量。
Real-time PCR与RT-PCR虽然有时缩写相同,但二者并非等同。国际上通常将RT-PCR特指为反转录PCR,而Real-time PCR则一般缩写为qPCR(实时荧光定量PCR)。
两者英文全称具有明显区别,Real-time PCR的全称为quantitative real-time PCR(实时荧光定量PCR),而RT-PCR的全称则是reverse transcription PCR(反转录PCR)。
当提及real time RT-PCR时,这指的是qPCR与RT-PCR的结合应用。具体而言,即先将RNA逆转录为cDNA作为模板,随后进行实时荧光PCR分析。虽然RT-PCR可进行定性分析,但无法进行定量检测。
不难理解real-time RT-PCR(或RT-qPCR)是将荧光定量技术结合到反转录PCR中:先通过RNA反转录得到cDNA(RT),随后使用Real-time PCR进行定量分析(qPCR)。
实时荧光定量PCR不仅可以使用cDNA作为模板,还可以使用基因组DNA等其他模板。
简而言之:
- RT-PCR代表的是反转录PCR。
- Real-time PCR即qPCR,代表的是实时荧光定量PCR。
- Real-time RT-PCR则是RT与qPCR的结合。